Invitrogen™ Apo-Direct Apoptosis Detection Kit

Le kit de détection d’apoptose APO-DIRECT™ comprend suffisamment de réactifs pour traiter un total de 50 suspensions cellulaires, notamment :

• 5 ml de suspensions de cellules témoins positives et 5 ml de suspensions de cellules témoins négatives d’environ 1 × 10⁶ cellules par ml dans de l’éthanol à 70 % (v/v) pour évaluer la performance des réactifs
• Tampons de lavage, de réaction et de rinçage pour le traitement des étapes individuelles du dosage
• Enzyme de désoxyribonucléotidyl transférase terminale (TdT), fluorescéine-désoxyuridine triphosphate et solution d’iodure de propidium/RNase A pour la contre-coloration de l’ADN total

L’une des caractéristiques les plus facilement mesurées des cellules apoptotiques est la rupture de l’ADN génomique par les nucléases cellulaires. Ces fragments d’ADN peuvent être extraits de cellules apoptotiques et entraîner l’apparition d’un échelonnement de l’ADN lors de l’analyse de l’ADN par électrophorèse sur gel d’agarose. L’ADN de cellules non apoptotiques qui reste pratiquement intact n’affiche pas cet échelonnement sur les gels d’agarose pendant l’électrophorèse.

Le grand nombre de fragments d’ADN apparaissant dans les cellules apoptotiques donne lieu à une multitude de terminaisons 3′-hydroxyle dans l’ADN. Cette propriété peut être utilisée pour identifier les cellules apoptotiques en marquant les extrémités 3′-hydroxyle avec des nucléotides de fluorescéine-désoxyuridine triphosphate directement conjugués (FITC-dUTP). L’enzyme désoxyribonucléotidyl transférase terminale (TdT) catalyse une addition indépendante du modèle de désoxyribonucléoside triphosphates aux extrémités 3′-hydroxyle de l’ADN double ou simple brin avec des extrémités franches, renfoncées ou saillantes. Un grand nombre de ces sites sont disponibles dans des cellules apoptotiques qui fournissent la base de la méthode utilisée dans le kit APO-DIRECT™. Les cellules non apoptotiques n’incorporent pas de quantités significatives de FITC-dUTP en raison du manque d’extrémités d’ADN 3′-hydroxyle exposées.