Invitrogen™ Catalase Colorimetric Activity Kit

Description

Le kit d’activité de catalase, à usage de recherche uniquement, est un test d’activité colorimétrique ; il est conçu pour la quantification et la détection de l’activité de la catalase dans le sérum, le plasma, les cellules, les tissus et les lysats d’érythrocytes.

Ce kit complet prêt à l’emploi comprend une ou plusieurs plaques transparentes à 96 puits, un étalon de catalase (100 unités/ml), un substrat de catalase et d’autres composants pour effectuer le dosage. Ce kit nécessite l’utilisation d’un lecteur de microplaques à 96 puits capable de lire la densité optique à 560 nm (plage acceptable : 540-580 nm).

Caractéristiques de performance
• Type de dosage : kit d’activité colorimétrique
• Types d’échantillons : sérum, plasma, cellules, tissus et lysats érythrocytaires.
• Sensibilité : 0,052 U/ml
• Plage de la courbe standard : 0,15–5,0 U/ml
• Réactivité : indépendante de l’espèce

Contexte
Le peroxyde d’hydrogène est l’un des dérivés réactifs de l’oxygène les plus fréquents. Il se forme soit dans l’environnement, soit comme sous-produit du métabolisme aérobie, de la formation et de la dismutation de superoxyde, soit comme produit de l’activité oxydase. L’excès de peroxyde d’hydrogène et son produit de décomposition, le radical hydroxyle, formé dans une réaction de type Fenton, sont tous deux nocifs pour la plupart des composants cellulaires. Son élimination rapide est essentielle pour toutes les cellules procaryotes et eucaryotes vivantes en aérobiose. Cependant, le peroxyde d’hydrogène peut servir de second messager dans les voies de transduction du signal, dans l’activation des cellules immunitaires, les processus d’inflammation, la prolifération cellulaire et l’apoptose.

L’une des façons les plus efficaces d’éliminer le peroxyde est d’utiliser l’enzyme catalase, qui est codée par un seul gène et qui est bien conservée d’une espèce à l’autre. Les mammifères, y compris les humains et les souris, expriment la catalase dans tous les tissus et une forte concentration de catalase se trouve dans le foie, les reins et les érythrocytes. L’expression est régulée aux niveaux de transcription, de post-transcription et de post-traduction. L’activité de catalase est élevée dans les peroxysomes. Plus récemment, il a été démontré que le rayonnement UV à courte longueur d’onde produit des dérivés réactifs de l’oxygène (DRO) par l’action de la catalase. Cette réponse est considérée comme un mécanisme de protection de l’ADN en convertissant le rayonnement UV nocif en espèces ROS pouvant être métabolisées et détoxifiées par les enzymes antioxydantes cellulaires. Ce dosage a été validé pour les plasmas de sérum, d’EDTA et d’héparine de diverses espèces.

Principe du dosage
Le kit d’activité de catalase est conçu pour mesurer quantitativement l’activité de la catalase dans une variété d’échantillons. Un étalon de catalase bovine est fourni pour générer une courbe d’étalonnage pour le dosage et tous les échantillons doivent être lus à partir de la courbe d’étalonnage. Les échantillons sont dilués dans le tampon de dosage fourni et ajoutés aux puits d’une plaque transparente à demi-surface. Le peroxyde d’hydrogène est ajouté à chaque puits et la plaque incubée à température ambiante pendant 30 minutes. Le réactif de détection colorimétrique fourni est ajouté, suivi de la péroxydase de raifort diluée et incubé à température ambiante pendant 15 minutes. Le HRP réagit avec le substrat en présence de peroxyde d’hydrogène pour convertir le substrat incolore en un produit de couleur rose. Le produit coloré est lu à 560 nm. L’augmentation des taux de catalase dans les échantillons entraîne une diminution de la concentration en peroxyde d’hydrogène et une réduction du produit de couleur rose.

Définition de l’unité catalase
Une unité catalase correspond à une micromole de peroxyde d’hydrogène par minute à 25°C et à un pH de 7,0.