Thermo Scientific™ Kit de clonage par PCR CloneJET™ avec cellules compétentes DH10B

• Ce pack comprend le kit de clonage par PCR CloneJET (20 ou 40 réactions) et les cellules compétentes DH10B optimisées pour une utilisation avec le kit et pouvant être directement transformées avec le produit de ligature

kit de clonage par PCR CloneJET
Un système perfectionné de sélection positive pour un clonage extrêmement efficace des produits de la PCR générés avec tout ADN polymérase thermostable. Tout fragment d’ADN à extrémités franches ou adhérentes peut être cloné. Le kit fonctionne bien avec des fragments d’ADN phosphorylés et non phosphorylés. La ligature dans le vecteur de sélection positive inclus ne prend que cinq minutes, et son rendement est de plus de 99 % de clones recombinants. Les produits PCR à extrémités franches générés avec une enzyme corrective sont ligaturés directement dans le vecteur de clonage.

Les produits PCR générés soit avec des ADN polymérases sans activité corrective soit avec des mélanges d’ADN polymérases doivent être débarrassés des extrémités avant la ligature dans une réaction de cinq minutes grâce à l’enzyme de coupe franche d’ADN, thermostable, fournie avec le kit. Les cellules compétentes DH10B sont optimisées pour une utilisation avec ce kit et peuvent être transformées directement avec le produit de ligature.

Contient le nouveau vecteur de clonage à sélection positive prêt à l’emploi pJET1.2/blunt. Le vecteur contient un gène d’enzyme de restriction létale qui est perturbé par ligature d’un insert d’ADN dans le site de clonage. Résultat : seules les cellules bactériennes avec plasmides recombinants sont capables de former des colonies. Les molécules re-circularisées du vecteur pJET1.2/blunt auxquelles il manque un insert expriment une enzyme de restriction létale qui tue la cellule E. coli hôte après transformation. Cette sélection positive accélère de façon radicale le processus d’analyse des colonies et élimine les coûts supplémentaires liés à la sélection bleu / blanc.

• Rapide : clonage par PCR en cinq minutes seulement
• Efficacité maximale : 99 % de clones positifs
• Pas de bruit de fond de clonage : vecteur à sélection positive
• Polyvalent : idéal pour le clonage des extrémités franches ou adhérentes
• Économique : pas de sélection coûteuse de bleu / blanc

Applications :

• Clonage de produits PCR à extrémité franche ou à extrémité 3’ dA jusqu’à 10 kb
• Clonage de fragments d’ADN générés par des enzymes de restriction
• Séquençage d’ADN cloné
• Transcription in vitro et in vivo d’inserts clonés à partir du promoteur T7

Cellules compétentes DH10B
Haute efficacité, cellules E. coli chimiquement compétentes. La souche DH10B convient au clonage de l’ADN contenant de la méthylcytosine et de la méthyladénine, permettant à la fois de cloner efficacement l’ADN génomique procaryotique et eucaryotique Ces cellules sont idéales pour la construction de bibliothèques d’ADNc à l’aide de vecteurs dérivés de plasmides. Génotype : F – mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ (ara-leu)7697 galU galK λ – rpsL(StrR) nupG.

• Haute efficacité de transformation : >1x109 cfu/µg d’ADN pUC19
• Convient aux applications de clonage courantes et à haut débit
• Deux réactions pratiques par emballage de flacons
• Le milieu S.O.C. Milieu de croissance inclus