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Invitrogen™ Dosage de cytotoxicité de la LDH CyQUANT™, fluorescence
Description
CyQUANT cytotoxicity assays provide a simple and reliable method to assess chemical or cell-mediated cellular toxicity. The CyQUANT LDH Cytotoxicity Assays and the CyQUANT Cytotoxicity Assay (G6PD Release Assay) use colorimetric- or fluorescence-based detection to measure the release of cytosolic enzymes (LDH or G6PD) from damaged cells. These cytotoxicity assays are optimized for use on microplate readers and can be used for continuous monitoring of cell health over time since cell lysis is not required, making them versatile tools for high-throughput screening and drug discovery applications.
La lactate déshydrogénase (LDH) est une enzyme cytosolique présente dans de nombreux types de cellules différents. Elle est libérée dans les milieux de culture cellulaire après avoir endommagé la membrane plasmique. Le dosage de cytotoxicité CyQUANT LDH, fluorescence, fournit les réactifs pour mesurer précisément et quantitativement cette LDH extracellulaire.
Le dosage de cytotoxicité CyQUANT LDH, fluorescence, comprend :
• Pratique—protocole de test add-mix-read pour les cellules adhérentes et en suspension, y compris les modèles de cellules 3D
• Précis—fournit une mesure quantitative de la libération de LDH
• Polyvalent—idéal pour le criblage à haut débit, surveillez la cytotoxicité du même échantillon au fil du temps
• Fiable—la formulation avec de la résazurine hautement purifiée donne une large plage dynamique de dosage
La LDH est une enzyme cytosolique présente dans de nombreux types de cellules différents et est un indicateur bien établi et fiable de la toxicité cellulaire. L’altération de la membrane plasmique entraîne une libération de la LDH dans les milieux de culture cellulaire environnants. Cette LDH extracellulaire peut être quantifiée par une réaction enzymatique couplée pendant laquelle la LDH catalyse la conversion du lactate en pyruvate via la réduction du NAD+ en NADH. La diaphorase utilise ensuite le NADH pour réduire la résazurine en résorufine qui peut être détectée en utilisant une excitation de 560 nm et une émission de 590 nm. Le niveau de formation de résorufine est directement proportionnel à la quantité de LDH libérée dans le milieu.
En conséquence des processus de synthèse et de fabrication, tous les réactifs à base de résazurine contiennent une quantité détectable de contamination par la résorufine. La quantité de contamination peut varier considérablement entre les sources du matériau et les conditions de fabrication, ce qui contribue à des différences dans la fluorescence de fond détectable. Plus important encore, la résorufine contaminante réduit le rapport signal/fond et la plage dynamique du dosage. Un procédé innovant a été développé pour éliminer la résorufine contaminante, permettant d’obtenir la résazurine très pure utilisée dans le test de cytotoxicité CyQUANT™ LDH, fluorescence.
Le test de cytotoxicité CyQUANT LDH, fluorescence, fournit les réactifs nécessaires à la quantification simple et fiable de la cytotoxicité cellulaire basée sur la fluorescence. Le kit peut être utilisé avec différents types de cellules, y compris des modèles cellulaires 3D, pour mesurer la cytotoxicité médiée par des composés chimiques ainsi que la cytotoxicité à médiation cellulaire. Étant donné que la LDH dans les milieux est l’indicateur de cytotoxicité cellulaire, le dosage peut être utilisé pour surveiller la cytotoxicité à partir du même échantillon au fil du temps. Pour effectuer le dosage, une aliquote issue des milieux de culture cellulaire est transférée sur une nouvelle plaque et le mélange de réaction est ajouté. Après une incubation de 10 minutes, la réaction est arrêtée en ajoutant une solution d’arrêt et la fluorescence est mesurée à l’aide d’un lecteur de microplaques.
Spécification
Spécification
| Perméabilité cellulaire | Imperméant aux cellules |
| Couleur | Rouge |
| Contenu et stockage | • 1 flacon de mélange de réactifs • 1 x 12 ml de mélange de rapporteurs • 1 x 2,5 ml de tampon de lyse • 1 x 12 ml de solution d’arrêt • 1 x 6 μl de contrôle positif de la LDH Conserver à -20°C et à l’abri de la lumière. |
| Description | Dosage de cytotoxicité de la LDH CyQUANT™, fluorescence |
| Méthode de détection | Fluorescence |
| À utiliser avec (application) | Dosage de cytotoxicité LDH |
| À utiliser avec (équipement) | Lecteur de microplaques |
| Type de produit | Dosage de cytotoxicité LDH |
| Type de colorant | Other Label(s) or Dye(s), Resorufin |
| Emission | 590 nm |
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