Thermo Scientific™ ARN ligase T4 (10 U/μl)

• Source : Cellules d’E. coli porteuses d’un gène 63 cloné du bactériophage T4
• Poids moléculaire : Monomère 43,6 kDa

• L’absence de ribonucléases, d’exodésoxyribonucléases, d’endodésoxyribonucléases et de phosphatases confirmée par des tests de qualité appropriés.

• Cellules d’E.coli porteuses d’un gène 63 cloné du bactériophage T4

Poids moléculaire :

• Monomère 43,6 kDa

Définition de l’unité d’activité :

• Une unité d’enzyme catalyse la conversion de 1 nmol de 5-[³²P]-(A)_12-18 en une forme résistante à la phosphatase en 30 min à 37°C
• L’activité enzymatique est dosée dans le mélange suivant : Tris-HCl 50 mM (pH 7,5), MgCl₂ 10 mM, DTT 10 mM, ATP 1 mM, 5’-[³²P]-(A)_12-18 10 μM (10 μM dans les terminaisons 5’)

Tampon de stockage :

• L’enzyme est fournie sous la forme suivante : Tris-HCl 20 mM (pH 7,5), DTT 1 mM, KCl 50 mM, EDTA 0,1 mM, détergent ELUGENT 0,03 % (v/v) et glycérol 50 % (v/v)

Tampon de réaction 10X :

• Tris-HCl 500 mM (pH 7,5 à 25°C), MgCl₂ 100 mM, DTT 100 mM, ATP 10 mM

Inhibition et inactivation :

• Inhibiteurs : chélateurs de métaux, réactifs modificateurs du groupe SH (8).
• Inactivation thermique à 70°C pendant 10 min.

Recommandé dans les cas suivants :

Marquage des extrémités 3’ des ARN avec de la cytidine 3’,5’-bis [alpha-³²P] phosphate (1) ; liaison entre ARN et ARN (2) ; synthèse d’oligoribonucléotides et d’oligodésoxyribonucléotides (3, 4) ; modifications spécifiques des ARNt (5) ; ligature d’oligodésoxyribonucléotides à des ADNc simple brin pour les 5’. RACE (amplification rapide d’extrémités d’ADNc) (6) ; production d’amorces composites spécifiques d’un site donné pour la PCR (7)

Remarque :

La concentration en BSA recommandée dans le mélange de réaction est de 0,1 mg/ml.