Invitrogen™ Premo™ Cellular Hydrogen Peroxide Sensor

Le capteur de peroxyde d'hydrogène cellulaire roGFP-Orp1 Chimera
Premo™ associe la sélectivité d'une chimère roGFP-Orp1 à l'efficacité de transduction de la technologie BacMam 2.0. La protéine verte fluorescente sensible au redox (roGFP) détecte le potentiel du redox à travers deux cystéines introduites dans la structure du tonneau β de la protéine GFP. La formation de disulfure entre les cystéines conduit à la protonation du GFP et augmente les spectres d’excitation de 400 nm au détriment des spectres d’excitation de 488 nm. La fluorescence aux deux longueurs d’onde d’excitation différentes peut être quantifiée à l’aide de la même longueur d’onde d’émission de 515 nm. Orp1 est une protéine de levure sensible au peroxyde d’hydrogène qui forme des disulfures en réaction avec le peroxyde d’hydrogène et qui a la capacité de transduire des signaux vers d’autres protéines redox par échange de disulfure. En combinant les propriétés sélectives du peroxyde d’hydrogène de l’Orp1 et du roGFP, il est possible de quantifier sélectivement le peroxyde d’hydrogène dans les cellules.

Technologie BacMam
Grâce à la technologie BacMam intégrée, ce capteur est prêt à l’utilisation— il suffit de l’ajouter aux cellules dans des milieux de croissance et de laisser incuber pendant la nuit. La technologie BacMam est basée sur l’utilisation d’un virus de cellules d’insectes (baculovirus) pour délivrer et exprimer efficacement des gènes dans les cellules de mammifères. Les cellules de mammifères ne prennent pas en charge la réplication des baculovirus, la transduction est extrêmement bien tolérée et en général, elle manque d’effets cytopathiques, même à des niveaux élevés de virus.