OPTIZYME™ EcoRI, Fisher BioReagents™

5’…G^A A A T C...3’
3’…C T T A A^G...5’

Conditions pour 100 % d’activité :

• 1X tampon OPTIZYME EcoRI : 50 mM Tris-HCl (pH 7,5 à 37°C), 10 mM MgCl2, 100 mM NaCI, 0,02 % Triton X-100 et 0,1 mg/ml BSA.
• Laissez incuber à 37°C.

Fourni avec : Tampon 10X OPTIZYME EcoRI
Activité enzymatique dans les tampons OPTIZYME :

• Tampon 1 : 0 - 20 %
• Tampon 2 : Aucune réaction
• Tampon 3 : 100 %
• Tampon 4 : Aucune réaction
• Tampon 5 : 100 %™

™L’activité Star se produit à une digestion excessive supérieure à 5-fois (5 unités X 1 heure)
Tampon de stockage :
10Phosphate de potassium de mM (pH 7,4 à 25°C), 300 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0,2 mg/ml BSA, 0,15 % Triton X-100 et 50 % (v/v) de glycérol.
Ligature et clivage :
Plus de 95 % des fragments d’ADN peuvent être ligaturés et recoupés après une digestion excessive 50 fois avec EcoRI.
Digestion de l’ADN incorporé à l’agarose :
Un minimum de 5 unités d’EcoRI est requis pour une digestion complète de 1 μg d’ADN lambda incorporé à l’agarose en 16 heures.
Remarque : Une faible concentration de sel, un grand excès de l’enzyme, le pH>8,0 ou le remplacement de mg²⁺ par Mn²⁺ peuvent entraîner une activité Star.
Extrémités compatibles : XAPI, MunI, Tasl.
Effets de méthylation :
Dam : ne se chevauche jamais - aucun effet.
Dcm : ne se chevauche jamais - aucun effet.
CpG : peut chevaucher clivage affecté.

• 5’…M5 C GAATTm5C G...3’

3’… Gm5CTTAA Gm5...5’

EcoKI : ne se chevauche jamais - aucun effet.

EcoBI : risque de chevauchement - aucun effet.

• 5’…TGm6AATTC(N)₄TGCT...3’

3’…AC TTAAG(N)₄m6ACGA...5’