Thermo Scientific™ Gélose tryptone-bile (déshydratée)

La récupération et le dénombrement des Escherichia coli et des coliformes présents dans les échantillons environnementaux ou alimentaires sont des indicateurs importants d’hygiène. La gélose tryptone bile a été mise a point d’après la formule d’Anderson et Baird-Parker² pour la recherche et la numération d’Escherichia coli dans les aliments.

Cette technique de dénombrement a plusieurs avantages sur les méthodes plus anciennes :

• Elle est plus rapide.
• Elle est plus fiable.
• Elle permet une meilleure récupération des germes dans les échantillons congelés.
• Elle détecte les souches anaérobies fermentant peu le lactose.

La technique de dénombrement direct sur plaque (DPM) décrite par Anderson et Baird-Parker est une modification de celle décrite par Delaney et coll.². Cette méthode a été mise au point pour rechercher et dénombrer Escherichia coli dans l’eau et les aliments ; elle utilise la capacité d’Escherichia coli à produire de l’indole à partir du tryptophane, à 44 °C sur une membrane d’acétate de cellulose placée sur la gélose tryptone bile.

Les auteurs ont montré qu’il était plus fiable d’identifier les souches d’Escherichia coli, productrices ou non d’entérotoxines, par la formation d’indole plutôt que par la fermentation du lactose. Ewing³ a montré que seulement 90 % des souches d’Escherichia acidifient le lactose en moins de deux jours, tandis que 99 % des souches produisent de l’indole.

L’International Commission on Microbiological Specifications for Foods” (CMSF)⁴ a comparé la technique du “nombre le plus probable” (NPP) à celle du dénombrement direct sur plaque (DPM). Cette dernière s’est montrée plus performante pour la numération d’Escherichia coli dans les viandes crues pour plusieurs raisons : elle est plus reproductible, plus rapide, permet une meilleure récupération d’Escherichia coli dans les échantillons congelés, et nécessite une plus faible quantité de milieu.

La méthode de dénombrement direct sur plaque détecte les souches d’Escherichia coli anaérobies qui fermentent lentement le lactose, ces souches n’étant pas détectées par la méthode NPP. Selon Ewing³, ces microorganismes représentent jusqu’à 10 % des souches d’Escherichia.

Holbrook et coll⁵ ont ensuite modifié la méthode de numération directe pour la recherche et la numération de cellules stressées d’Escherichia coli dans les aliments congelés, déshydratés ou acides. Cette modification consiste à placer l’inoculum sur une membrane d’acétate de cellulose, elle-même déposée sur une gélose au glutamate modifiée, le tout étant incubé 4 heures à 37 °C. Cette étape permet de revivifier les cellules stressées avant le transfert de la membrane sur la gélose tryptone bile.

Il a été démontré qu’un taux élevé d’hydrates de carbone fermentés inhibe la synthèse de tryptophanase⁶ et stoppe ainsi la formation d’indole. Holbrook et coll ont montré que l’étape de revivification abaisse la concentration élevée de sucre présent dans l’inoculum à un niveau permettant la production d’indole par Escherichia coli sur la gélose tryptone bile. L’étape de revivification est indispensable pour étudier les produits laitiers et autres produits très riches en sucres.

Le réactif à l’indole, décrit par Vracko et Sherris⁷, est le plus adapté car il donne la réaction et la reproductibilité les plus nettes. Le réactif, 5 % de p-diméthylaminobenzaldéhyde dans de l’acide fluorhydrique 1N, est facile à préparer et stable pendant trois mois s’il est stocker dans l’obscurité et à température ambiante.

Les souches indole positif donnent des colonies bien roses lorsqu’elles sont “colorées ’ par le réactif à l’indole ; les colonies qui ne produisent pas d’indole sont de couleur jaune paille.

La croissance des organismes indole positif, autres que Escherichia coli, est inhibée par l’action sélective des sels biliaires et la température d’incubation élevée.

Les membranes “colorées ’ peuvent être “fixées ’ par un séchage au soleil ou sous lampe UV fluorescente à basses pressions munie d’un filtre de type “wood ’. Le séchage des membranes augmente l’intensité de la réaction de coloration et permet de les conserver comme membranes de référence.

Les produits ne sont pas tous disponibles à la vente dans tous les pays. Veuillez nous contacter.

Les produits Remel™ et Oxoid™ font désormais partie intégrante de la marque Thermo Scientific