Invitrogen™ Vybrant™ FLICA Caspase Apoptosis Assay Kits for flow cytometry

Les kits de dosage de caspase Vybrant FAM pour la cytométrie en flux utilisent une nouvelle approche pour détecter les caspases actives : les kits tirent parti de la méthodologie FLICA, qui est un marqueur d’affinité. Ce marqueur d’affinité associe une fraction de cétone de fluorométhyl (FMK), qui peut réagir de façon covalente avec une cystéine, à une séquence d’amino-acides spécifique à la caspase. Différentes séquences de reconnaissance d’amino-acides sont utilisées pour détecter différentes caspases : valine-alanine-acide aspartique (VAD) pour les polycaspases (notamment caspase 1, 3, 4, 5, 6, 7, 8 et 9), acide aspartique-acide glutamique-valine-aspartique (DEVD) pour les caspases 3 et 7 et leucine-acide glutamique-thréonine-acide aspartique (LETD) pour la caspase 8. Un groupe de carboxyfluorescéines (FAM) fait office de rapporteur.

On pense que le réactif FLICA interagit avec le centre réactif enzymatique d’une caspase activée via la séquence de reconnaissance puis qu’il se fixe de manière covalente par la fraction FMK. L’inhibiteur FLICA est perméant aux cellules et non cytotoxique. Les molécules FLICA non liées se diffusent hors de la cellule et sont lavées ; le signal fluorescent restant constitue une mesure directe de la quantité de caspase active présente au moment de l’ajout de l’inhibiteur. Les pics approximatifs d’excitation et d’émission des réactifs FLICA, iodure de propidium et Hoechst 33342 sont respectivement de 488 nm⁄530 nm, 535 nm⁄6 617 nm et 350 nm⁄461 nm. Les réactifs de détection inclus dans les kits d’apoptose de dosage des polycaspases Vybrant FAM, de dosage des caspases 3 et 7 et de dosage des caspases 8 sont respectivement le réactif FAM-VAD-FMK 488⁄530, le réactif FAM-DEVD-FMK 488 ⁄530 et le réactif FAM-LETD-FMK 488⁄530.