Invitrogen™ Kit de clonage PCR Zero Blunt™ TOPO™, sans cellules compétentes

Description

Ce kit inclut le vecteur Zero Blunt TOPO qui possède le gène ccdB comme sélecteur positif, autorisant seulement la croissance des vecteurs de plasmide recombinants. Résistant à la kanamycine (KanR) et à la Zeocin™ (ZeoR).
Vecteur PCRBlunt II-TOPO : conçu pour la correction de polymérases
Le vecteur PCRBlunt II-TOPO est conçu pour cloner des produits PCR à extrémités franches générés par des polymérases thermostables à activité corrective telles que l’ADN polymérase Platinum™ Pfx. Le vecteur PCR Blunt II-TOPO comporte :

• Sites EcoRI flanquant le site d’insertion du produit PCR, pour une excision simple des inserts
• Gènes de résistance à la kanamycine et à la zéocine permettant de choisir la méthode de sélection dans la bactérie E. coli
• Site promoteur/amorce SP6 pour la transcription et le séquençage de l’ARN in vitro
• Sites d’amorce sens et antisens M13 pour le séquençage ou l’analyse PCR

La sélection de clone PCR-Blunt II-TOPO
PCR-Blunt II-TOPO permet de sélectionner directement les recombinants grâce à la rupture du gène E. coli, ccdB létal. Le vecteur contient le gène ccdB fusionné à l’extrémité carboxylique du fragment LacZα. La ligature d’un produit de PCR à extrémités franches perturbe l’expression du gène de fusion LacZα-ccdB, permettant seulement la croissance des recombinants positifs après transformation. Les cellules contenant des vecteurs non recombinants sont éliminées durant l’étalement. Par conséquent, un screening bleu ou blanc n’est pas requise.
Clonage simplifié basé sur TOPO
Grâce à la technologie de clonage TOPO, il n’est pas nécessaire d’utiliser des amorces pour PCR contenant des séquences spécifiques ou des procédures post-PCR, de préparer les vecteurs ni d’effectuer d’autres étapes de manipulation longues d’ADN. Il suffit d’ajouter votre réaction PCR directement dans le vecteur chargé en topoisomérase fourni, d’incuber pendant 5 minutes et de transformer les cellules compétentes d’E. coli.
Clonage efficace
Avec jusqu’à 95 % de clones porteurs de l’insert désiré, il vous suffit d’analyser moins de clones, ce qui vous permet de gagner du temps et de l’argent. Le vecteur PCR Blunt II-TOPO utilisé dans ce kit est doté du gène létal ccdB pour une sélection efficace de produits recombinants PCR à extrémités franches générés par des polymérases thermostables à activité corrective.
La norme en matière de clonage
En matière de clonage, la technologie de clonage TOPO™ est un partenaire fiable pour des milliers de scientifiques depuis plus de dix ans. Rapide, simple d’utilisation et efficace, le clonage TOPO™a été appliqué à de nombreux vecteurs différents pour un large éventail d’applications.
Options du kit de clonage par PCR Zero Blunt TOPO
Le kit de clonage par PCR Zero Blunt TOPO, pour l’insertion directe des produits de PCR à extrémités franches dans un vecteur de plasmide, peut s’acheter avec une variété de cellules compétentes qui offrent différents avantages selon vos besoins
Clonage général : Cellules TOP10 (No de catalogue K2800-20, K2800-40)
Clonage haute efficacité : Cellules ™ TOP10 Electrocomp (No de catalogue K2860-01, K2860-40)
Clonage général, résistance au bactériophage T1 : DH5α-T1R (No de catalogue K2820-20, K2820-40)
Croissance rapide : Mach1™-T1R chimiquement compétente E. Coli (No de catalogue K2830-20)
Fournissez la vôtre : pour une souplesse et des économies (No de catalogue 450254
Une version du kit qui inclut un kit de minipréparation d’ADN plasmidique rapide PureLink™ (No de catalogue K2800-02) à utiliser pour l’isolement de plasmide recombinant propre et prêt pour le séquençage est également disponible.

• Rapide et simple : seulement trois étapes, réalisées en cinq minutes à peine, séparent le clonage de la PCR
• Efficace : obtenez jusqu’à 95 % de clones avec le bon insert
• Résultats prouvés : performances fiables pendant plus d’une décennie avec plus de 4 000 citations
• Simple : aucune ligase, procédure post-PCR ou amorce pour PCR contenant des séquences spécifiques n’est requise
• Vecteur : vecteur PCR™Blunt II-TOPO, il possède le gène ccdB qui permet la sélection directe des recombinants
• Méthode de clonage : Clonage TOPO : basé sur la topoisomérase I, ligature en 5 minutes des produits de PCR à extrémités franches et amplifiés avec des polymérases thermostables à activité corrective
• Cellules compétentes : plusieurs options : choisissez parmi les kits qui proposent des cellules compétentes (disponibles séparément) générales, à efficacité élevée, résistantes au bactériophage T1 ou à croissance rapide ; ou utilisez les vôtres.
• Résistance aux antibiotiques : Ampicilline (AmpR), kanamycine (KanR)

Clonage, clonage par PCR