Pourquoi la filtration des échantillons et des phases mobiles est-elle essentielle pour l’analyse HPLC ?
Filtrer ou pas ?
Des problèmes graves peuvent être évités en matière d’analyse par chromatographie en phase liquide à haute performance (HPLC) en étant attentif aux signes avant-coureurs et en effectuant un entretien de routine. La plupart des tâches de remplacement de pièces de HPLC, comme le remplacement des joints de pompe, sont facilement reconnues comme des tâches d’entretien nécessaires. Cependant, la filtration des échantillons et des phases mobiles est également une pratique d’entretien très importante.
La filtration des échantillons et des phases mobiles est une pratique économique simple qui prolonge la durée de vie des consommables d’un système HPLC, réduit l’usure du système et préserve l’intégrité de ce dernier. En examinant les conséquences de mauvaises pratiques de filtration, les analystes peuvent se familiariser avec les signes avant-coureurs de problèmes liés à la filtration et éviter les dépenses et les temps d’arrêt liés aux longs travaux d’entretien et aux coûts de remplacement.
Quel type de filtre rechercher ?
L’injection d’échantillons propres prolonge la durée de vie de la vanne d’injection et de la colonne. Les particules et les bactéries sont éliminées des échantillons grâce à des filtres pour seringue jetable. Les filtres à usage unique varient en taille (4 à 25 mm) et en seuil de filtration (0,2 à 1,0 μm). Les filtres pour seringue sont des membranes enfermées dans des boîtiers en plastique qui se fixent à une seringue à l’aide d’un raccord Luer. Les échantillons sont filtrés en aspirant le fluide dans la seringue, en attachant le filtre, et en distribuant l’échantillon à travers le filtre dans un flacon. Pour réduire la variabilité physique et chimique entre les fabricants, les produits de filtration des échantillons et des phases mobiles doivent être achetés auprès du même fabricant.
Un filtre avec un seuil de filtration de 0,45 μm est généralement sélectionné pour les applications de HPLC, tandis que pour l’UHPLC et les applications d’élimination bactérienne il est préférable de choisir un filtre avec un seuil de 0,2 μm. Pour les échantillons chargés de particules, Pall incorpore des préfiltres à larges pores dans un dispositif ayant des membranes avec de plus petits pores. Des filtres stériles et à faible absorption protéinique sont également disponibles. Les injecteurs HPLC sont disponibles dans plusieurs styles, y compris un septum, un dispositif d’arrêt sans septum et un système de vanne manuel ou automatisé. Un injecteur de valve est le plus typique. Un injecteur doit assurer l’introduction des échantillons reproductibles.
La filtration des échantillons et des solvants empêche les raccords d’injecteur à faible volume de se bloquer, de se rayer et de fuir. Un blocage de la boucle ou du conteneur de récupération des liquides entraîne une contre-pression élevée et un remplissage difficile de la boucle. Les raccords à faible volume mort, situés entre l’injecteur de vanne et la colonne pour diminuer l’élargissement de la bande, sont également sujets à un blocage. Les autres facteurs contribuant aux problèmes de HPLC comprennent les composants d’injecteur mal appariés ou endommagés, les volumes d’échantillons variables, les fuites et l’augmentation de la pression du système. Avec le système de filtre, les injecteurs correctement ajustés et propres devraient fonctionner pour 5 000 injections.
Le choix du filtre approprié nécessite une connaissance de la compatibilité entre les filtres et les solvants et des caractéristiques chimiques et physiques du filtre. Ces caractéristiques comprennent la taille des pores (seuil de filtration), la répartition des pores, l’épaisseur du filtre, les matières extractibles, le caractère hydrophobe et hydrophile, les propriétés de fixation, la pyrogénicité, le taux de dilution des gaz et des liquides, la résistance à l’éclatement, la capacité d’autoclavage, la taille des pores et la rétention nominale des particules. Le choix du mauvais filtre pourrait compromettre les résultats d’analyse des matières extractibles. Pour l’analyse chromatographique, les scénarios résultant des matériaux extractibles comprennent l’absorption des échantillons, la coélution et les pics superflus.
Comment choisir le bon filtre ?
- Votre filtration est-elle automatisée ou manuelle ?
- Quelle est la compatibilité chimique du filtre ?
- Quelle est la surface effective de filtration (EFA) nécessaire pour votre système de filtration ?
- Quel seuil de filtration devrait être utilisée pour une filtration efficace ?
Résumé
La filtration des échantillons et des phases mobiles est une pratique économique simple qui peut prolonger la durée de vie des consommable pour la HPLC. Avec une compréhension de base de la façon dont une filtration adéquate bénéficie aux différentes composantes d’un système HPLC, et en sélectionnant le bon filtre, les laboratoires peuvent réduire les temps d’arrêt et les dépenses inutiles en réparation et remplacement inattendus de pièces.
