Thermo Scientific™ ActivX™ Desthiobiotin-FP Serine Hydrolase Probe

Description

Les sondes de fluorophosphonate (FP) Thermo Scientific™ ActivX permettent le marquage covalent du site actif de la sérine hydrolase avec des marquages d’affinité, fluorescents ou réactifs pour faciliter l’enrichissement sélectif, la détection ou le marquage multiplex.

Les sondes FP ActivX™ sont dotées d’un groupe réactif de fluorophosphonate qui marque spécifiquement et de façon covalente la sérine de site actif des hydrolases sérines enzymatiques actives. Ces sondes sont disponibles avec un marqueur de desthiobiotine (analogue de la biotine) pour l’enrichissement sélectif ou un groupe d’azido réactif (réactifs de Staudinger) qui facilite le marquage multiplex lorsqu’elles sont utilisées avec des marqueurs dérivés de phosphine ou d’alcyne.

Les sondes d’enrichissement de site actif ActivX sont avantageuses pour déterminer les teneurs en enzymes actives à l’aide de sondes à marqueur analogique afin de permettre le profilage des enzymes actives et inactives. Les sondes ActivX enrichissent de manière sélective uniquement les enzymes qui sont fonctionnellement actives et biologiquement pertinentes au moment du marquage. Grâce à l’enrichissement sélectif, on peut identifier et profiler les classes d’enzymes cibles dans les échantillons ou évaluer la spécificité et l’affinité des inhibiteurs enzymatiques.

Applications des sondes FP ActivX :
• Déterminez l’activité de l’enzyme hydrolase à sérine dans les cellules et les lysats
• Cartographiez la sérine du site actif des membres de la famille des hydrolases à sérine fonctionnellement diverses (p. ex., les protéases, les lipases, les estérases)
• Criblez les affinités de liaison des petites molécules et de l’inhibition du site actif
• Profilez les hydrolases à sérine en utilisant les flux de travaux par fluorescence, transfert Western ou spectrométrie de masse

La superfamille des hydrolases à sérine est l’une des familles d’enzymes les plus importantes et les plus diversifiées des protéomes eucaryotes. Les hydrolases à sérine sont généralement regroupées en deux grandes familles : les protéases à sérine (par exemple, la trypsine, l’élastase et la thrombine) et les hydrolases à sérine métaboliques. Les hydrolases à sérine métaboliques sont divisées en plusieurs sous-classes enzymatiques (par exemple, estérases, lipases, amidases et peptidases) en fonction de la structure, du mécanisme catalytique et de la préférence du substrat. Ces sondes peuvent être utilisées pour évaluer l’activité ou pour cribler les inhibiteurs de petites molécules contre les enzymes dérivées des lysats cellulaires, des fractions infracellulaires, des tissus et des protéines recombinantes.

L’évaluation du marquage de sites actifs avec des sondes de desthiobiotine peut être réalisée par transfert Western ou par spectrométrie de masse (SM). Pour le flux de travaux de transfert Western, les protéines marquées à la desthiobiotine sont enrichies pour l’analyse SDS-PAGE et la détection ultérieure avec des anticorps spécifiques. Pour le flux de travail MS, les protéines marquées à la desthiobiotine sont réduites, alkylées et enzymatiquement digérées en peptides. Seuls les peptides marqués à la desthiobiotine et sur site actif sont enrichis pour analyse par LC-MS/MS. Les deux flux de travaux peuvent être utilisés pour déterminer la liaison de cibles d’inhibiteurs, mais seul le flux de travaux SM peut identifier les effets sur cible et hors cible d’inhibiteurs globaux. La sonde Azido-FP peut être utilisée en association avec un marqueur dérivatisé de phosphine ou d’alcyne pour la détection ou l’enrichissement des hydrolases de sérine à l’aide d’un transfert Western ou d’une spectrométrie de masse.

Ces produits sont soumis à une licence d’utilisation limitée.