Thermo Scientific™ Mass Spectrometry Compatible Crosslinkers

Description

Chemical crosslinking in combination with mass spectrometry is a powerful method to improve protein characterization, and to identify protein-protein interactions. This method has been applied to recombinant and native protein complexes, and more recently, to whole cell lysates or intact unicellular organisms in efforts to identify protein-protein interactions on a global scale. The enrichment feature of DSPP and TBDSPP improves detection of crosslinked proteins by reducing sample complexity through separation of crosslinked from non-crosslinked peptides.

• Agent de réticulation tri-fonctionnel : Ester NHS (les deux extrémités), acide phosphonique (DSPP) ou ester phosphonate (TBDSPP) dans l’espaceur pour l’enrichissement
• Réactifs cristallins de haute pureté pour la caractérisation de la structure et de l’interaction des protéines
• Version perméable à la membrane (TBDSPP) pour la réticulation intracellulaire
• Enrichissement à l’aide de Fe-NTA IMAC ou de TiO₂ MOAC

DSPP (acide phénylphosphonique de disuccinimidyle, Phox) et TBDSPP (tert-butyl disuccinimidyl phényle phosphonate, tBu-PhoX) sont des agents de réticulation phospho-enrichissables qui contiennent un ester N-hydroxysuccinimide (NHS) réactif aux amines à chaque extrémité d’un bras espaceur de 7 atomes avec un groupe d’acide phosphonique (DSPP) ou un ester de phosphonate (TBDSPP) pour l’enrichissement. Les deux réagissent efficacement aux groupes d’amines primaires (-NH2) dans des tampons d’un pH de 7 à 9 pour former des liaisons amides stables. Les groupes d’esters phosphoniques ou phosphonates peuvent ensuite être utilisés pour enrichir les peptides réticulés à l’aide de la chromatographie d’affinité pour métaux immobilisés (IMAC) ou de la chromatographie d’affinité pour oxyde de métal (MOAC).

Parmi les deux agents de réticulation MS enrichissables, le DSPP est plus soluble dans l’eau que le TBDSPP et est mieux adapté aux réticulations in vitro, aux protéines purifiées simples et aux complexes protéiques. Le TBDSPP est mieux adapté à la réticulation intracellulaire en raison d’une perméabilité accrue de la membrane. Bien que les deux agents de réticulation puissent être enrichis à l’aide de méthodes de phosphopeptides traditionnelles, les peptides réticulés au TBDSPP doivent d’abord être incubés à l’aide de TFA pour éliminer les groupes de protection tert-butyle. Le groupe d’acide phosphonique TBDSPP (après clivage d’acide) n’est pas un substrat pour les phosphatases, ce qui permet d’éliminer les phosphopeptides endogènes dans les échantillons avant l’enrichissement.

Remarque : Pour l’analyse à haute résolution des peptides réticulés, la colonne LC recommandée pour la source Nanospray Flex est la colonne LC Acclaim PepMap 100 C18 (n° de réf. 164940 ou 164568). Pour une source EASY-Spray, la colonne LC recommandée est la colonne LC EASY-Spray-C18 (réf. ES900 ou ES904).