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Thermo Scientific™ Phusion™ Site-Directed Mutagenesis Kit with DH10B Competent Cells

Un outil polyvalent et efficace pour réaliser des mutations ponctuelles, des insertions ou des suppressions dans tous les types d’ADN plasmide. Grâce à ce kit, le plasmide complet est amplifié à l’aide d’amorces phosphorylatées qui introduisent les changements souhaités.

Marque:  Thermo Scientific™ F542

204.67 EUR valable jusqu'au 2024-03-29
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Informations supplémentaires : Poids : 0.07200kg

Code produit. 16471595

  • 307.00€ / 20 réactions
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Description

Description

  • Cette solution comprend un kit de mutagénèse dirigée Phusion et des cellules compétentes DH10B optimisées pour être utilisées avec le kit.
  • Kit de mutagénèse dirigée Phusion :
    • Grâce à ce kit, le plasmide complet est amplifié à l’aide d’amorces phosphorylatées qui introduisent les changements souhaités.
    • Le produit PCR linéaire amplifié, contenant la mutation souhaitée, est circularisé par ligation rapide (5 minutes) à l’aide de la ligase d’ADN T4. Le plasmide résultant peut ensuite être transformé dans les cellules E. coli. Il est recommandé d’utiliser les cellules compétentes DH10B avec le kit.
    • La température d’hybridation optimale pour les ADN polymérases Phusion peut différer significativement de celle des polymérases à base de Taq. Pour obtenir des résultats optimaux, commencez par calculer votre Tm avec précision à l’aide de notre calculatrice de Tm.
    • Méthode d'amplification exponentielle robuste et fiable
    • Aucune exigence particulière (concernant des vecteurs spéciaux, des sites de restriction ou un état de méthylation donné) pour le plasmide cible
    • Destruction du modèle de départ au cours d'une étape distincte non nécessaire
    • L’ADN polymérase haute fidélité Phusion Hot Start II réduit au maximum les mutations secondaires indésirables.
    • Amplification des plasmides de grande taille (jusqu’à 10 kb)
    • Grâce à la modification du démarrage à chaud, la polymérase empêche l’amplification des produits non spécifiques et la dégradation indésirable des amorces avant le premier cycle de PCR.
    • Ligase d’ADN T4 fournie dans le kit ; aucune étape de purification nécessaire avant ou après la ligation
  • Cellules compétentes DH10B
    • Cellules E. coli chimiquement compétentes à haute efficacité
    • La souche DH10B convient au clonage de l’ADN contenant de la méthylcytosine et de la méthyladénine, permettant ainsi de cloner efficacement l’ADN génomique procaryote et eucaryote.
    • Ces cellules sont idéales pour la construction de bibliothèques d’ADNc à l’aide de vecteurs dérivés de plasmides.
    • Génotype : F– mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ (ara-leu)7697 galU galK λ– rpsL(StrR) nupG
Spécification

Spécification

DH10B
Kit
≥ 1 x 10^9
Mutagénèse
20 réactions
Kit de mutagenèse dirigée contre le site
Glace carbonique
Boîte 1
• 10 cellules compétentes DH10B, 100 µl
• d’ADN pUC19, 50 µl, 100 pg / µl
• de milieu S.O.C., 5 ml
Conserver à -80°C.

Boîte 2
• ADN polymérase Phire Hot Start II, 10 µl, 2 U / µl
• tampon HF Phusion (5X), 1,5 ml
• mélange dNTP, 10 mM chacun, 20 µl
• FastDigest DpnI, 20 µl
• plasmide de contrôle (dans un tampon TE), 5 ng / µl
• mélange d’amorces de contrôle (25 μM chacun, amorces phosphorylatées 5’), 20 µl
• ligase ADN T4, 15 µl
• tampon de ligation rapide (5X), 200 µl
Conserver à -20°C.
Produits de PCR
Maxima H Minus
Mutagenèse sur site unique
Phusion, Thermo Scientific™
20 réactions
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