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Thermo Scientific™ Phusion™ Site-Directed Mutagenesis Kit with DH10B Competent Cells
Un outil polyvalent et efficace pour réaliser des mutations ponctuelles, des insertions ou des suppressions dans tous les types d’ADN plasmide. Grâce à ce kit, le plasmide complet est amplifié à l’aide d’amorces phosphorylatées qui introduisent les changements souhaités.
Marque: Thermo Scientific™ F542
224.11 EUR valable jusqu'au 2024-06-28
Utilisez le code promo "21649" pour bénéficier de cette offre.
Informations supplémentaires : Poids : 0.07200kg
Description
- Cette solution comprend un kit de mutagénèse dirigée Phusion et des cellules compétentes DH10B optimisées pour être utilisées avec le kit.
- Kit de mutagénèse dirigée Phusion :
- Grâce à ce kit, le plasmide complet est amplifié à l’aide d’amorces phosphorylatées qui introduisent les changements souhaités.
- Le produit PCR linéaire amplifié, contenant la mutation souhaitée, est circularisé par ligation rapide (5 minutes) à l’aide de la ligase d’ADN T4. Le plasmide résultant peut ensuite être transformé dans les cellules E. coli. Il est recommandé d’utiliser les cellules compétentes DH10B avec le kit.
- La température d’hybridation optimale pour les ADN polymérases Phusion peut différer significativement de celle des polymérases à base de Taq. Pour obtenir des résultats optimaux, commencez par calculer votre Tm avec précision à l’aide de notre calculatrice de Tm.
- Méthode d'amplification exponentielle robuste et fiable
- Aucune exigence particulière (concernant des vecteurs spéciaux, des sites de restriction ou un état de méthylation donné) pour le plasmide cible
- Destruction du modèle de départ au cours d'une étape distincte non nécessaire
- L’ADN polymérase haute fidélité Phusion Hot Start II réduit au maximum les mutations secondaires indésirables.
- Amplification des plasmides de grande taille (jusqu’à 10 kb)
- Grâce à la modification du démarrage à chaud, la polymérase empêche l’amplification des produits non spécifiques et la dégradation indésirable des amorces avant le premier cycle de PCR.
- Ligase d’ADN T4 fournie dans le kit ; aucune étape de purification nécessaire avant ou après la ligation
- Cellules compétentes DH10B
- Cellules E. coli chimiquement compétentes à haute efficacité
- La souche DH10B convient au clonage de l’ADN contenant de la méthylcytosine et de la méthyladénine, permettant ainsi de cloner efficacement l’ADN génomique procaryote et eucaryote.
- Ces cellules sont idéales pour la construction de bibliothèques d’ADNc à l’aide de vecteurs dérivés de plasmides.
- Génotype : F– mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ (ara-leu)7697 galU galK λ– rpsL(StrR) nupG
Spécification
DH10B | |
Kit | |
≥ 1 x 10^9 | |
Mutagénèse | |
20 réactions | |
Kit de mutagenèse dirigée contre le site | |
Glace carbonique |
Boîte 1 • 10 cellules compétentes DH10B, 100 µl • d’ADN pUC19, 50 µl, 100 pg / µl • de milieu S.O.C., 5 ml Conserver à -80°C. Boîte 2 • ADN polymérase Phire Hot Start II, 10 µl, 2 U / µl • tampon HF Phusion (5X), 1,5 ml • mélange dNTP, 10 mM chacun, 20 µl • FastDigest DpnI, 20 µl • plasmide de contrôle (dans un tampon TE), 5 ng / µl • mélange d’amorces de contrôle (25 μM chacun, amorces phosphorylatées 5’), 20 µl • ligase ADN T4, 15 µl • tampon de ligation rapide (5X), 200 µl Conserver à -20°C. |
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Produits de PCR | |
Maxima H Minus | |
Mutagenèse sur site unique | |
Phusion, Thermo Scientific™ | |
20 réactions |