Comment éviter les pointes de filtre qui perturbent la PCR
La recherche a montré que la qualité des pointes de filtre est essentielle pour assurer un traitement sans contamination des échantillons. De manière surprenante, les pointes de filtre peuvent également être à l'origine d'une contamination lors d'une expérience.
Une série d'études récentes a montré que des éléments spécifiques trouvés dans certaines marques de pointes de filtre peuvent expliquer les échecs inattendus des essais. En outre, les pointes de filtre fabriquées par Labcon™ se sont avérées avoir le niveau le plus bas de plusieurs éléments connus pour avoir un effet sur les techniques expérimentales courantes.
La spectrométrie de masse à plasma inductif (ICP-MS) a été utilisée pour effectuer une analyse élémentaire de 68 interférents courants afin de déterminer le risque posé pour des essais cliniques et de recherche spécifiques. Ce test rigoureux, le premier du genre, a été réalisé sur différents filtres polymères que l'on trouve dans les marques d'embouts filtrants disponibles dans le commerce afin de quantifier les éléments potentiels, les additifs, les contaminants, les substances lixiviables et les substances extractibles. Les interférences expérimentales peuvent provenir de la présence de certains éléments inorganiques, de métaux lourds ou d'additifs d'étanchéité. Les essais ont également incorporé une analyse des performances du matériau filtrant pour qualifier la capacité de performance dans des environnements spécifiques.
Certains des résultats de l'ICP-MS et des analyses ont mis l'accent sur les effets négatifs sur la réaction en chaîne de la polymérase (PCR). Les pointes de filtre peuvent être présentées comme exemptes d'inhibiteurs de la PCR, mais elles peuvent contenir des impuretés qui les rendent moins adaptées à certains essais sensibles. Des éléments tels que le calcium, le silicium et le zinc présentent des risques évidents et peuvent modifier les résultats expérimentaux.
"Des études montrent que le processus d'amplification PCR est influencé par des éléments spécifiques qui affectent la polymérisation de l'ADN, le recuit des amorces ou la déviation du signal de fluorescence utilisé pour la détection et la quantification en qPCR."
Plus précisément, le calcium peut agir comme un inhibiteur de la Taq polymérase dans la PCR, avec des effets sur l'amplification de l'ADN causés par une liaison compétitive entraînant une amplification moins efficace. Les résultats de l'ICP-MS indiquent que les pointes de filtre fabriquées par des concurrents peuvent contenir jusqu'à 20 fois plus de calcium que les pointes de filtre Labcon™. Le zinc peut également agir comme un inhibiteur de la Taq polymérase dans la PCR, avec des effets supposés causer une détérioration de la performance de l'enzyme. Une analyse similaire sur la présence de zinc dans les filtres a donné un niveau de zinc 38 fois plus élevé dans les pointes concurrentes par rapport aux pointes filtrantes Labcon™. Le silicium a également été identifié comme un ion perturbateur dans la PCR, avec un mécanisme potentiellement lié à l'adhésion de la Taq polymérase au silicium pendant l'amplification. Le silicium s'est avéré avoir un niveau 10 fois plus élevé dans les alternatives d'embouts filtrants concurrents par rapport aux embouts filtrants Labcon™.
L'utilisation accrue des pointes filtrantes a conduit à de nouvelles normes de qualité innovantes et à l'amélioration des résultats expérimentaux dans les contextes expérimentaux, précliniques et cliniques. L'utilisation des pointes filtrantes dans les laboratoires CLIA (Clinical Laboratory Improvement Amendments) effectuant des diagnostics, des génotypages et des cultures de tissus accroît la nécessité de disposer de consommables dignes de confiance pour fournir des diagnostics cliniques précis et éviter les résultats compromis. Les pointes de filtre Labcon™ de haute qualité, fabriquées en Californie, se sont avérées supérieures dans de multiples mesures d'éléments potentiellement inhibiteurs. La capacité des pointes filtrantes Labcon™ à fournir une performance sans contamination garantit l'exactitude, la précision et la reproductibilité de vos résultats et soutient la prochaine génération de techniques améliorées de manipulation des liquides.
