Molecular Probes™ Intracellular pH Calibration Buffer Kit

Le kit de tampons pour étalonnage du pH intracellulaire permet la quantification du pH intracellulaire lorsqu’il est utilisé avec les indicateurs de pH intracellulaires pHrodo™ rouge AM, pHrodo™ vert AM ou BCECF. Les indicateurs pHrodo™ rouge AM et pHrodo™ vert AM sont faiblement fluorescents à un pH neutre mais de plus en plus fluorescents lorsque le pH diminue. La modification des colorants pHrodo™ rouge et vert par des groupes d’ester AM se solde par une molécule non chargée qui peut pénétrer dans les membranes cellulaires. Une fois à l’intérieur de la cellule, les groupes bloquants lipophiles sont clivés par des estérases non spécifiques, ce qui entraîne un composé qui est retenu dans l’espace intracellulaire. L’intensité de fluorescence des sondes est alors un indicateur du pH intracellulaire. L’utilisation ultérieure du kit de tampons pour étalonnage de pH intracellulaire permet de quantifier ce pH intracellulaire.

Le kit de tampons pour étalonnage de pH intracellulaire contient une gamme de tampons pour étalonnage du pH (pH 4,5, 5,5, 6,5 et 7,5), ainsi que de la valinomycine et de la nigéricine, qui permettent d’équilibrer le pH à l’intérieur et à l’extérieur des cellules. Après l’utilisation de pHrodo™ rouge AM ou pHrodo™ vert AM et la mesure de l’intensité de fluorescence dans des conditions expérimentales, les cellules sont resuspendues dans l’un des tampons pour étalonnage auquel la valinomycine et la nigéricine ont été ajoutées, et l’intensité de la fluorescence est mesurée une nouvelle fois. Cette procédure est répétée avec les tampons restants pour étalonnage afin qu’une courbe standard puisse être créée et utilisée pour déterminer le pH intracellulaire associé aux conditions expérimentales.