Réactifs de dissociation

Un réactif de dissociation est une substance chimique utilisée pour décomposer ou séparer des structures biologiques complexes en leurs composants individuels. Ces réactifs sont couramment utilisés dans diverses procédures de laboratoire pour dissocier des cellules, des tissus ou des complexes moléculaires. Voici quelques exemples et leurs applications :

Dissociation cellulaire

• Trypsine : Une enzyme utilisée pour dissocier les cellules adhérentes des surfaces de culture et les unes des autres en décomposant les protéines.
• Collagénase : Une enzyme qui décompose le collagène dans les tissus, utilisée pour isoler les cellules à partir d'échantillons de tissus.

Dissociation des complexes protéiques

• Détergents (par exemple, SDS, Triton X-100) : Utilisés pour solubiliser et dissocier les complexes protéiques en perturbant les interactions hydrophobes.
• Urée ou chlorhydrate de guanidine : Dénaturants puissants utilisés pour dissocier les interactions protéine-protéine en perturbant les liaisons hydrogène et les interactions hydrophobes.

Dissociation des acides nucléiques

• Formamide : Utilisé pour dénaturer les acides nucléiques en perturbant les liaisons hydrogène entre les paires de bases.
• Solutions alcalines (par exemple, NaOH) : Utilisées pour dénaturer l'ADN en rompant les liaisons hydrogène.

La trypsine et l'EDTA sont couramment utilisés ensemble pour dissocier les cellules adhérentes en culture cellulaire. Voici comment chacun fonctionne :

Trypsine est une enzyme protéolytique qui décompose les protéines. Elle clive spécifiquement les liaisons peptidiques du côté carboxyle des acides aminés lysine et arginine. Lorsqu'elle est appliquée à une culture cellulaire, la trypsine digère les protéines qui médiatisent l'adhésion cellule-cellule et cellule-matrice, détachant efficacement les cellules du récipient de culture et les unes des autres.

EDTA (acide éthylènediaminetétraacétique) est un agent chélateur qui se lie aux ions métalliques divalents tels que le calcium et le magnésium. Ces ions métalliques sont essentiels au fonctionnement des molécules d'adhésion cellulaire (CAM) comme les intégrines et les cadhérines. En chélatant ces ions, l'EDTA perturbe les CAM, affaiblissant les interactions cellule-cellule et cellule-matrice et augmentant l'efficacité de la trypsine.

L'EDTA est souvent utilisé en conjonction avec la trypsine dans une solution de trypsine-EDTA. L'EDTA affaiblit d'abord l'adhésion cellulaire en chélatant les ions calcium et magnésium, puis la trypsine décompose davantage les protéines d'adhésion, facilitant ainsi une dissociation cellulaire efficace. L'utilisation de la trypsine et de l'EDTA ensemble assure une dissociation efficace et douce des cellules adhérentes, minimisant les dommages et maintenant la viabilité des cellules.